Overview
Product name | JC-1(500x) |
Catalog no | FXP133-500 |
Size | 500 μl |
Applications
储存条件 | -20℃保存,1年有效。建议分装后保存,请勿反复冻融。若是冻融建议不要超过2次。 |
描述 | JC-1广泛应用于线粒体膜点位的流式检测。其能够选择性进入线粒体,并且在线粒体膜电位增加(大约超过80~100mV)时,其能够实现绿色荧光到橙色荧光的可逆变化。该特性源于JC-1聚集在膜上的可逆形式,引起发射光从530nm到590nm的转换(530nm激发光对应JC-1单体形式,590nm对应J聚体)。490nm激发时,线粒体膜极化,JC-1颜色由绿色转为绿橙色。这两种颜色一般都能够利用流式细胞仪配备的不同通道检测到,FL1通道能够分析绿色荧光,FL2通道分析绿橙色荧光。JC-1的主要优势是既能用于定性分析又能用于定量分析,绿色向橙色荧光转换用于定性分析,纯色荧光强度用于定量分析,都能在FL1和FL2两个通道检测。JC-1除了能用于流式检测,还能用于荧光成像。我们还对其荧光微孔板成像的应用做了说明。尽管JC-1能够广泛应用于多种实验,但因其水溶性差也影响一些应用的实现。我们的JC-10比JC-1水溶性更好,并且在一些细胞系中JC-10比JC-1效果更好。JC-10的性能依赖于细胞系。 |
实验步骤 | 1.准备JC-1工作液: 1.1室温解冻JC-1(500×)。为避免反复冻融,可根据实验情况进行分装成多支。 1.2 准备1×JC-1工作液:根据细胞培养板及样本数计算需要1×JC-1工作液的用量。具体可参考下表1,然后根据用量配置成1×JC-1工作液:取适量JC-1(500×),先加入少量Hanks或HHBS缓冲液,用移液枪反复吹打或剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1,补足缓冲液体积。 【例如:需要用流式管处理10个样本,那么共需要5ml的1×JC-1工作液,为避免沾带,我们可以多配置一点。配置 6 ml的1×JC-1工作液,那需要取12 μL的JC-1(500×),加入Hanks和HHBS缓冲液总体积为5988 μL】 注:JC-1不溶于水,所以其在溶液中呈聚集状态。建议转入细胞前过滤JC-1工作液。 表1 1. 对照设置: 2.1 阳性对照:用化合物诱导细胞凋亡(例如,Jurkat细胞用喜树碱处理4~6小时),得到阳性对照样本。 2.2 空白对照:加入等量的Hanks或HHBS缓冲液。 3. 样本处理及检测: 2.1 按照表1用量把 1×JC-1工作液到细胞培养板或流式管。 2.2 加入JC-1工作液的细胞培养板或流式管,在37℃,5% CO2 条件下孵育15~60min。 注:最佳孵育时间需要根据细胞类型和细胞浓度来优化。 2.3 去除培养板内的JC-1工作液,600g,4℃,离心5分钟,弃上清。 2.4 加入Hanks或HHBS缓冲液洗涤细胞。加入原体积量Hanks或HHBS缓冲液重悬细胞,600g,4℃,离心5分钟,弃上清。重复2次。加入适量的Hanks或HHBS缓冲液重悬细胞。 2.5 上机检测:荧光显微镜(利用FITC和TRITC通道)或流式细胞仪(利用FLI和FL2通道)检测Ex/Em=490/525和490/590的荧光变化。 1. 分析: 2. 荧光显微镜:(利用FITC和TRITC通道)。 3.2用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况,绿色荧光通过FL-1(FITC)通道检测,红色荧光通过FL-2(PE)通道检测。FL-1+,FL-2+为正常细胞,FL-1+,FL-2-为凋亡细胞。以下是阳性对照,空白对照及检测流式样本图。 参考文献: [1].Daniela Smejkalová, Tomáš Muthny, Kristina Nešporová.Hyaluronan polymeric micelles for topical drug deliveryHyaluronan polymeric micelles for topical drug delivery [2].Helma Freitag, Friederike Christen, Florentine Lewens.Inhibition of mTOR's Catalytic Site by PKI-587 Is a Promising Therapeutic Option for Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumor Disease.Neuroendocrinology (2016) [3].Yujia Yuan, Meimei Shi, Lan Li, Jingping Liu, Bo Chen.Mesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1 PathwayMesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1 Pathway 相关产品: |
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