Overview

Product name JC-10(500x)
Catalog no FXP134-100
Size 100 μl

Applications

储存条件 -20℃保存,1年有效。建议分装后保存,请勿反复冻融。若是冻融建议不要超过2次。
描述 JC-10是一种新型的阳离子亲脂性荧光指示剂,用来检测线粒体膜电位。JC-10可以选择性地进入线粒体,由于膜电位的增加,其颜色从绿色到红色出现可逆性转变。这种特性是由于JC-10聚合物的可逆结构。在膜极化条件下,它的发射光由520nm (JC-10 单体)转移到570nm (J-聚合体)。这两种颜色都可以被流式细胞仪上滤光器检测到。绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析,红色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。适合多种细胞系的检测,如神经细胞和肌细胞等。而且也可以用于研究如ATP合成、活性氧(ROS)和细胞凋亡等过程。同样JC-10也可以用于荧光显微镜和荧光酶标仪分析。 低膜电位时,JC-10累计在线粒体内,并且大多数均是单体(Monomer)形式存在,在膜电位增高时,越来越多的JC-10累计在线粒体基质(Matrix)内,形成聚合物(J-aggregates),发射光也由520nm变为570nm。JC-10聚合体是膜极化的一种功能体现,JC-10荧光强度能反映出线粒体膜的去极化和超极化。 *相较于JC-1,JC-10具有更多的优点: 良好的水溶性 操作简单,省时。 信号强,良好信噪比 误差小,良好的结果一致性
实验步骤 1.准备JC-10工作液: 1.1室温解冻JC-10(500×)。为避免反复冻融,可根据实验情况进行分装成多支。 1.2 准备1×JC-10工作液:根据细胞培养板及样本数计算需要1×JC-10工作液的用量。具体可参考下表1,然后根据用量配置成1×JC-10工作液:取适量JC-10(500×),先加入少量Hanks或HHBS缓冲液,用移液枪反复吹打或剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-10,补足缓冲液体积。 【例如:需要用流式管处理10个样本,那么共需要5ml的1×JC-10工作液,为避免沾带,我们可以多配置一点。配置 6 ml的1×JC-10工作液,那需要取12 μL的JC-10(500×),加入Hanks和HHBS缓冲液总体积为5988 μL】 注:JC-10不溶于水,所以其在溶液中呈聚集状态。建议转入细胞前过滤JC-10工作液。 表1 1. 对照设置: 2.1 阳性对照:用化合物诱导细胞凋亡(例如,Jurkat细胞用喜树碱处理4~6小时),得到阳性对照样本。 2.2 空白对照:加入等量的Hanks或HHBS缓冲液。 3. 样本处理及检测: 2.1 按照表1用量把 1×JC-10工作液到细胞培养板或流式管。 2.2 加入JC-10工作液的细胞培养板或流式管,在37℃,5% CO2 条件下孵育15~60min。 注:最佳孵育时间需要根据细胞类型和细胞浓度来优化。 2.3 去除培养板内的JC-10工作液,600g,4℃,离心5分钟,弃上清。 2.4 加入Hanks或HHBS缓冲液洗涤细胞。加入原体积量Hanks或HHBS缓冲液重悬细胞,600g,4℃,离心5分钟,弃上清。重复2次。加入适量的Hanks或HHBS缓冲液重悬细胞。 2.5 上机检测:荧光显微镜(利用FITC和TRITC通道)或流式细胞仪(利用FLI和FL2通道)检测Ex/Em=490/525和490/590的荧光变化。 1. 分析: 2. 荧光显微镜:(利用FITC和TRITC通道)。 3.2用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况,绿色荧光通过FL-1(FITC)通道检测,红色荧光通过FL-2(PE)通道检测。FL-1+,FL-2+为正常细胞,FL-1+,FL-2-为凋亡细胞。以下是阳性对照,空白对照及检测流式样本图。 参考文献: [1].Daniela Smejkalová, Tomáš Muthny, Kristina Nešporová.Hyaluronan polymeric micelles for topical drug deliveryHyaluronan polymeric micelles for topical drug delivery [2].Helma Freitag, Friederike Christen, Florentine Lewens.Inhibition of mTOR's Catalytic Site by PKI-587 Is a Promising Therapeutic Option for Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumor Disease.Neuroendocrinology (2016) [3].Yujia Yuan, Meimei Shi, Lan Li, Jingping Liu, Bo Chen.Mesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1伪 PathwayMesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1 相关产品:

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