简介:
细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞周期可以分为四个时相:G1(DNA 合成前期);S 期 (DNA 合成期);G2 期(DNA 合成后期)和M 期(有丝分裂期)。根据染色体的倍数进行分类分为三个时相:G1 期、S期和 G2/M 期三个时相。
采用流式方法来检测细胞周期,简单又方便,常用DNA染料:碘化丙啶(propidium iodide,PI)和7-氨基 - 放线菌素D(7-amino-actinomycin D ,7-AAD),PI可以和双链DNA、RNA结合,因此实验中需要用RNase处理细胞。
名称 | 激发光 | 发射光 | 固定 | RNA酶 | 常用通道 | 货号 |
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PI | 488/561nm | 615nm | YES | YES | PE | FXP0211 |
7-AAD | 488/561nm | 635~675nm | YES | NO | percp | FXP031 |
实验操作:
实验tips:
1. 细胞悬液制备:组织细胞可以用含EDTA的0.25%的胰酶消化,推荐使用Accumax(Cat:AM-105);贴壁细胞、干细胞推荐使用Accutase(Cat:AT-104)。
2. 乙醇固定细胞:为了减少细胞粘连,将细胞悬液(细胞放在冰上)逐滴加到4倍体积预冷的95%乙醇里。固定2小时以上或者过夜。(过夜操作,可以将细胞悬液放置在-20℃)。
3. 染色时,避光。
4. PI具有很强的粘附性,容易形成细胞聚团,建议使用200目的筛网过滤后上机。。
5. 上机时,荧光通道设置为线性(lin)放大。
6. 收集数据时,注意去除粘连细胞。
数据分析实例:Jurkat细胞周期分析
FXP0211 PI细胞周期检测试剂盒流式图
图一: 根据FSC、SSC排除碎片,E1圈定细胞;
图二: 根据PI-H、PI-A排除粘连体,P2为单个细胞;
图三: G1、S、G2/M期分别如图;
FXP031 7-AAD细胞周期检测试剂盒流式图
图四: 根据FSC、SSC排除碎片,Ea1圈定细胞;
图五: 根据7-AAD-H、7-AAD-A排除粘连体,P2为单个细胞;
图六: G1、S、G2/M期分别如图;
产品货号 | 产品名称 | 规格 |
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FXP021 | PI细胞周期检测试剂盒 | 50T/100T/200T |
FXP0211 | PI细胞周期检测试剂盒(含RNase) | 50T/100T/200T |
FXP031 | 7-AAD细胞周期检测试剂盒 | 50T/100T/200T |
FXP031 | 7-AAD细胞周期检测试剂盒(含RNase) | 50T/100T/200T |