亲，你的抗体对验证过没？如何验证呢？
酶联免疫吸附试验（ELISA）作为临床诊断、食品安全检测及生命科学研究中最常用的定量 / 定性技术之一，其核心性能取决于抗体对（捕获抗体与检测抗体）的质量。抗体对的特异性、亲和力及配对兼容性直接决定了 ELISA 的灵敏度、精密度、准确度与稳定性。
一、ELISA 抗体对的基础认知
ELISA 的核心原理是通过 “捕获抗体 - 靶标 - 检测抗体” 的三明治结构（双抗夹心法，最常用模式）实现靶标的特异性结合与信号放大，其中捕获抗体（包被于固相载体）负责特异性结合靶标，检测抗体（偶联酶 / 荧光素等标记物）负责识别靶标的另一表位并输出信号。根据抗体来源，ELISA 抗体对主要分为 “单克隆抗体（mAb）- 单克隆抗体”“单克隆抗体 - 多克隆抗体（pAb）” 两类，其特性差异直接影响 ELISA 性能：
*四正柏提供的抗体对均为mAb-mAb型抗体对
二、ELISA 抗体对关键性能指标的测定方法
抗体对的性能通过灵敏度、精密度（CV）、准确度（回收率）及稳定性四大核心指标评价，其测定方法需遵循中华人民共和国也要行业标准YY/T1183-2010，确保结果可靠。
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灵敏度检测：
检测方法：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的吸光度值(A值),计算其平均值(M)和标准差(SD), 得出M+2SD (如果原理为竞争法，则为M-2SD) 所对应的A值，根据试剂盒所用校准品的确定标曲线和拟合方程，并将A值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为检测限。
以human TNF-a抗体对为例：
标准曲线：
四参数Logistic曲线拟合，r^2 =0.99990
OD值均值：（μ）(n1+...n24）/24=0.0461
OD值标准差：（σ）=0.003
LOD：μ+2σ=0.0521，带入标曲计算出对应的检测下限为2.027pg/ml。
2、精密度检测
2.1批内重复性检测
用至少2个浓度水平的样本各重复检测10次，计算10次测量浓度结果的平均值M 和标准差SD以及变异系数CV。
下面是以human TNF-a抗体对为例测定结果：
标曲如下：
四参数Logistic曲线拟合，r^2 =0.99981
上清4*OD值均值：0.423，标准差：0.023，CV：5.44%
上清8*OD值均值：0.186，标准差：0.013，CV：6.99%
CV批内：（标准差/均值）*100%，小于10%为合格。
2.2不同批次间重复性检测
用3个批号的试剂(盒)分别检测同一份样本，各重复10次，计算30次测量浓度值结果的平均值M和标准差SD以及变异系数CV。
下面是以human TNF-a抗体对为例测定结果：
标曲如下：
上清8# 样本浓度均值41.295968，标准差：3.2047，CV：7.76%。
2.3回收率检测
将浓度已知的高水平待测物(A) 加入到低浓度的血清(或其他体液成分)B 中，所加待测物与血清(或其他体液成分)B之间的体积比例为不大于1:9,根据以下公式计算结果，得到回收率R值。
R—— 回收率；
V——样 品A 液的体积；
V。——样品B 液的体积；0
c ——样 品B 液加入A 液后的检测浓度；
co——样 品B 液的浓度；
cs——样 品A 液的浓度。
注：低浓度的血清可以为正常人血清。
以human IL-4抗体对为例：
以高浓度标准品稀释液为A液；以含Human IL-4含量较低的血清，血清2*稀释后为B液。
a. 5000pg/ml的标准品溶液25ul+2*血清225ul（其中标准品理论浓度为500pg/ml）
b. 2500pg/ml的标准品溶液25ul+2*血清225ul（其中标准品理论浓度为250pg/ml）
c. 1250pg/ml的标准品溶液25ul+2*血清225ul（其中标准品理论浓度为125pg/ml）
d. 625pg/ml的标准品溶液25ul+2*血清225ul（其中标准品理论浓度为62.5pg/ml）
实验布局:
实验结果:
标准曲线：
四参数Logistic曲线拟合r^2 =0.99976
回收率计算（复孔取平均值计算）
结论：血清中样本含量过低，软件无法计算出来忽略不计，四种浓度下的标准品样本含量计算的回收率均在80%-120%，回收率合格，抗体对合格。
3、稳定性验证
我们对Human TNF-α进行稳定性实验（4℃条件）的数据&分析图
结果分析：
实验结果说明，该抗体对在4°条件下可稳定保存一年。
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