ELISA样品制备指南

该指南旨在作为教育资源，指南中提供的各种制备方法适用于常规ELISA。样品的制备方法通常也会随测定靶标和检测方法而适当变化。在建立新的检测方法时，建议查阅相关文献或进行必要的流程优化。在收集样品前有必要建立完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜样品尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期性收集样品，在造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰箱与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。

样品制备方法

液体类型样品

液体类实验样品包括：血清、血浆、尿液、胸腹水、细胞培养上清等。

【细胞培养上清】

将细胞培养基移至离心管，并在4℃ 条件下以 1,500 rpm 离心10分钟。立即等分上清液并于 -80℃ 下保存样品。尽可能减少样品冻融。

【血清】

室温血液自然凝固10-20分钟后，在4℃ 条件下以 3,000 rpm 离心10分钟。立即等分上清液并于 -80℃ 下保存样品。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。避免反复冻融样品。

【血浆】

将全血收集到含抗凝血剂的管中，根据标本的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，在 4℃ 条件下以 3,000 rpm 离心10分钟。立即等分上清液（血浆）并于 -80℃ 下保存样品。避免反复冻融样品。

【尿液】

用无菌管收集，并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。立即等分上清液并于 -80℃ 下保存样品。避免反复冻融样品。

【唾液】

收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。等分上清液并在 -80℃ 下保存样品。避免反复冻融样品。

组织样品

采集组织（最好在冰上操作，并应尽可能快以防止被蛋白酶降解）样品后，称取组织净重，用液氮迅速冷冻保存备用。将样品保存在 -80℃ 下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。加入一定量的组织提取缓冲液，用手工或匀浆器将样品匀浆充分。在 4℃ 下以 13000 rpm 离心 20 分钟。置于冰上，将上清液（可溶的蛋白质提取物）等分至新的冷却管中并在-80℃下保存样品。避免反复冻融样品。

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